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          阿比特龍abiraterone上調22Rv1小鼠異種移植模型中腫瘤SLCO1B3的表達

          時間:2022-03-11 11:38 來源:康安途 作者:康安途出國看病

            為了評估阿比特龍(abiraterone)是否可以在體內上調SLCO1B3,我們用醋酸阿比特龍或載體對照處理帶有 22Rv1 異種移植物的小鼠 5 天或 15 天。正如預期的那樣,阿比特龍治療不會減少 22Rv1 異種移植物的生長(數據未顯示),這與之前的研究一致。在醋酸阿比特龍治療 5 天后,切除腫瘤并消化以測量 mRNA 轉錄物。與載體對照相比,阿比特龍治療的腫瘤表現出SLCO1B3 mRNA 表達增加 2.5 倍(p < 0.05)。治療 15 天后,與用載體對照治療的對照小鼠相比,接受阿比特龍治療的小鼠的SLCO1B3上調相似(p < 0.05)。在治療的第 15 天,小鼠肝臟中的slco1b2(人類SLCO1B3的小鼠類似物)水平適度下降。

          阿比特龍

            我們之前已經證明肝臟型SLCO1B3(lt-SLCO1B3) 主要在前列腺腫瘤組織中過表達。我們接下來確定阿比特龍誘導的SLCO1B3mRNA 表達是否發生在啟動子水平。以熒光素酶報告基因測定為特征的SLCO1B3啟動子(包含來自轉錄起始位點的全長 1492 bp 上游啟動子)的分析顯示對阿比特龍處理沒有順式調節反應。

            因此,我們假設驅動阿比特龍誘導的SLCO1B3上調的機制是轉錄后的,可能由 miRNA 介導。為了研究 miRNA 和lt-SLCO1B3表達之間的關系,我們使用 NanoString nCounter Human v3 miRNA 面板分析了用 20 μM 阿比特龍處理 24 小時的 22Rv1 細胞的 miRNA 轉錄組。該檢測快速有效地分析了 800 個高度精選的人類 miRNA。我們選擇了這種基于雜交的核酸計數方法來避免擴增偏差,但代價是分辨低豐度的 miRNA 種類。三種 miRNA 物種 hsa-miR-579-3p、hsa-miR-16-5p 和 hsa-mir-181a-5p 被鑒定為顯著差異表達,表現出大于 1.5 倍的變化(P<0.05)。

            為了預測在阿比特龍治療下具有穩定表達的 miRNA 種類,來自 NanoString 面板的全局歸一化計數被輸入到 RefFinder,這是一個聚合穩定性排名程序 BestKeeper、NormFinder、Genorm 和比較 ∆-Ct 方法的程序每個程序生成的排名。Hsa-let-7e-5p、hsa-miR-32-5p 和 hsa-miR-148b-3p 被預測為最穩定的潛在參考基因。通過 qPCR 分析驗證了這些參考基因的穩定性。由于它被 RefFinder 列為最穩定的,因此 hsa-let-7e-5p 被選為參考物種,將測量選定的 miRNA 物種,盡管使用 hsa-miR-32-5p 和 hsa-miR-148b- 3p 提供了類似的結果。更多詳情可咨詢下方微信。

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